Hướng dẫn qui trình tách trứng (Denuding)
1. VẬT LIỆU – DỤNG CỤ
– Kính hiển vi soi nổi có gắn bàn ấm
– Pipette Pasteur
– Đĩa 4 giếng
– Môi trường HyaseTM nồng độ 800 IU/mL
– Môi trường GIVFTM plus
2. TÁCH TRỨNG
– Pha loãng 0.1 ml Hyase với 0.9 ml GIVF plus. Hút nhả nhiều lần để trộn đều.
– Đĩa 4 giếng được chuẩn bị truớc khi sử dụng 2 tiếng và giữ ấm trong tủ 37oC, 6% CO2: giếng đầu tiên chứa 0.5 ml Hyase đã được pha loãng, 3 giếng còn lại mỗi giếng chứa 0.5 ml GIVF plus. Phủ 0.25 ml dầu cho tất cả các giếng.
– 4 cây pipette Pasteur được chuẩn bị như sau: 1 cây đuợc hơ dưới ngọn lửa đèn cồn tạo đầu hơi tù, 3 cây còn lại được kéo dưới ngọn lửa đèn cồn tạo đầu tròn với kích thước nhỏ dần và vừa đủ lớn hơn đường kính trứng (120-150 pm) để có thể tách hết tế bào cumulus xung quanh trứng.
– Tiến hành tách trứng 2-3 giờ sau chọc hút trứng.
– Gắn pipette Pasteur đầu tù vào syringe 1ml.
– Dùng pipette Pasteur đầu tù hút trứng từ môi trường GIVF plus chuyển sang giếng chứa Hyase. Quá trình chuyển trứng cần phải được double-check.
– Hút nhả trứng nhiều lần trong Hyase (tối đa 10 lần) để tách bớt tế bào cumulus bao quanh trứng. Sau đó chuyển trứng sang giếng chứa GIVF plus.
– Gắn pipette Pasteur đầu nhọn vào mouth pipette.
– Lần lượt dùng pipette Pasteur với các kích thước khác nhau hút nhả trứng nhiều lần trong các giếng chứa GIVF plus để dần dần lọai bỏ hết các tế bào cumulus bao quanh trứng.
– Trứng sau khi đã lọai bỏ hết các tế bào cumulus bao quanh, sẽ đươc phân lọai là trứng MI hay trứng MII dựa vào sự hiện diện của thế cực thứ nhất (1st polar body), trứng non GV hay trứng thoái hóa…
– Chuyển trứng trở lại vào môi trường GIVF plus sạch: giếng số 4 chứa trứng MII, giếng số 3 chứa trứng MI, GV và trứng thoái hóa.. .Quá trình chuyển
trứng cần phải được double-check. Sau đó cho đĩa GIVF plus vào tủ ấm 37oC,
6% CO2.
Đĩa tách trứng
Bacsidanang.com – Thông tin khám bệnh ở Đà Nẵng, Thiết bị y tế Gia đình Đà Nẵng .
Danh bạ bác sĩ, phòng khám ở Đà Nẵng, dịch vụ y tế, khám tiết niệu nam khoa ở Đà Nẵng, phẫu thuật thẩm mỹ ở Đà Nẵng, thiết bị y tế gia đình Đà Nẵng, thực phẩm chức năng Đà Nẵng.
